兼容单片段、多片段同源重组

图1. 插入1个和多个片段的阳性克隆鉴定结果

 

使用QuarCam Plus Seamless Cloning Kit分别进行1个和多个片段的重组实验，结果显示可兼容一个或者多个目标片段的插入连接。(A)带有重组质粒的大肠杆菌细胞在抗性平板上的生长情况。(B)插入1个片段的菌落PCR琼脂糖凝胶电泳检测结果。(C)插入4个片段的菌落PCR琼脂糖凝胶电泳检测结果。 (D)插入10个片段的菌落PCR琼脂糖凝胶电泳检测结果。

 

克隆阳性率高

 

重组体系	插入片段个数	克隆子总数(个)	菌落PCR阳性率	测序阳性率	总阳性率
太阳集团	插入1个片段	988	24/24 (100%)	23/24 (96%)	96%
	插入4个片段	349	22/24 (92%)	18/22 (82%)	75%
	插入10个片段	336	20/24 (83%)	16/20 (80%)	67%
友商	插入1个片段	920	24/24 (100%)	22/24 (92%)	92%
	插入4个片段	286	18/24 (75%)	13/18 (72%)	54%
	插入10个片段	90	12/24 (50%)	6/12 (72%)	25%

 

表1. 插入1个或多个片段的阳性克隆子统计

 

使用太阳集团和友商产品分别进行1个、4个和10个片段的重组实验，重组产物转化平板后，分别从各自平板挑取24个克隆进行菌落PCR，琼脂糖凝胶电泳显示片段大小正确为阳性；挑取菌落PCR阳性克隆进行一代测序，重组区序列完全正确为阳性。结果显示不管是单片段还是多片段的重组实验 ，其阳性率均优于友商。