兼容单片段、多片段同源重组

图1. 插入1个或4个片段的阳性克隆鉴定结果

 

使用QuarCam Seamless Cloning Kit分别进行1个和4个片段的重组实验，结果显示可兼容一个或者多个目标片段的插入连接。（A）带有重组质粒的大肠杆菌细胞在抗性平板上的生长情况。（B）插入1个片段的菌落PCR琼脂糖凝胶电泳检测结果。（C）插入4个片段的菌落PCR琼脂糖凝胶电泳检测结果。

 

克隆阳性率高

 

重组体系	插入片段个数	克隆子总数(个)	菌落PCR阳性率	测序阳性率	总阳性率
太阳集团	插入1个片段	988	24/24 (100.0%)	19/20 (95.0%)	95.0%
	插入4个片段	602	22/24 (91.7%)	16/20 (80.0%)	73.4%
友商	插入1个片段	920	24/24 (100.0%)	15/20 (75.0%)	75.0%
	插入4个片段	304	18/24 (75.0%)	11/20 (55.0%)	41.3%

 

表1. 插入1个或4个片段的阳性克隆子统计

 

使用太阳集团和友商产品分别进行1个和4个片段的重组实验，重组产物转化平板后，分别从各自平板挑取24个克隆进行菌落PCR，琼脂糖凝胶电泳显示片段大小正确为阳性；挑取菌落PCR阳性克隆进行一代测序，重组区序列完全正确为阳性。结果显示不管是单片段还是多片段的重组实验 ，其阳性率均优于友商。